說起反轉(zhuǎn)錄，小編相信當(dāng)大家提取出高質(zhì)量的RNA時，肯定開心的手舞足蹈，滿心歡喜想著接下來的實驗輕輕松松搞定！這樣想沒錯，但是如果你想在論文或者匯報中得到漂亮的數(shù)據(jù)，那反轉(zhuǎn)錄這一步也非常關(guān)鍵。所以今天小編給大家梳理了反轉(zhuǎn)錄實驗過程中需要注意的幾個要點，希望大家在實驗過程中多多留意，獲得漂亮的數(shù)據(jù)。
一、選擇最佳的反轉(zhuǎn)錄引物
反轉(zhuǎn)錄引物一般分為三類：oligo dT、隨機引物、基因特異性引物。oligo dT，可識別具有poly(A)尾的真核mRNA，從而獲得真核生物mRNA全長。隨機引物，可以結(jié)合到樣本中的任何類型RNA，但并不能獲得整個基因全長的cDNA。基因特異性引物，是根據(jù)實驗者的特定需求設(shè)計出來的，適用于目的序列已知的情況，產(chǎn)生所需的cDNA。
二、考慮RNA的二級結(jié)構(gòu)
若要獲取全長RNA的反轉(zhuǎn)錄，那么我們就需要考慮RNA內(nèi)部是否含有二級結(jié)構(gòu)，因為反轉(zhuǎn)錄酶在遇到二級結(jié)構(gòu)時會終止反應(yīng)或從模板上脫落下來。通常GC含量高的基因意味著RNA很難被變性且不可能是單鏈。高效且熱穩(wěn)定性強的反轉(zhuǎn)錄酶，可有效克服高GC、低豐度模板的反轉(zhuǎn)錄難題。
三、去除基因組DNA
污染性基因組DNA(gDNA)可能會干擾RNA反轉(zhuǎn)錄，并導(dǎo)致后續(xù)PCR或qPCR實驗結(jié)果出現(xiàn)假陽性、高背景或檢測率低等情況。通常在RNA提取過程中加入合適濃度的DNase I，37℃加熱10-15min，去除干擾基因組DNA。另外，如果是做qPCR實驗，更簡單的方法則是選用含有去除基因組DNA的試劑盒。
四、選擇合適的反轉(zhuǎn)錄方法
RT-PCR和RT-qPCR有兩種選擇：一步法和兩步法。一步法，反轉(zhuǎn)錄和（q）PCR擴增是在同一個反應(yīng)管中進行。兩步法，反轉(zhuǎn)錄與（q）PCR擴增反應(yīng)單獨進行。兩種方法各有優(yōu)缺點。
注意事項這么多，您需要一套可全面應(yīng)對上述問題的高性能產(chǎn)品！
GenStar新一代StarScript III M-MLv反轉(zhuǎn)錄酶，擁有卓越的cDNA合成能力，全面提升合成產(chǎn)量、提高熱穩(wěn)定性，克服了低豐度、復(fù)雜模板難題！
產(chǎn)品特點
·熱穩(wěn)定性
可耐受37-65℃反應(yīng)溫度，適合高GC復(fù)雜模板的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
·兼容性強
適用于不同物種、各種類型的RNA模板。
·靈敏度高
針對各種RNA模板，克服低豐度、復(fù)雜模板難題。
·產(chǎn)品全面
根據(jù)不同的實驗應(yīng)用場景，可選擇含去基因組試劑、預(yù)混試劑或試劑盒。
·應(yīng)用廣泛
可應(yīng)用于基因全長cDNA合成、qPCR等實驗。
產(chǎn)品性能展示
1. StarScript III耐受37-65℃反應(yīng)溫度
不同的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度獲得的水稻cDNA，1 kb片段擴增
StarScript II最佳反應(yīng)溫度為42℃，耐受50℃；StarScript III最佳反應(yīng)溫度50-55℃，耐受65℃。
2. 低豐度、復(fù)雜模板也能完美反轉(zhuǎn)錄
以水稻RNA為模板，不同品牌反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后，qPCR檢測結(jié)果
GenStar StarScript III靈敏度高，對于高GC、低表達基因的檢測效果理想。
3. 線性范圍廣，反轉(zhuǎn)錄效果佳
GenStar StarScript III一步法qRT-PCR試劑盒-探針法（UNG）（Cat#A338）檢測小鼠RNA模板，檢測基因GAPDH
結(jié)果顯示，A338靈敏度高，檢測下限可達1 pg；熒光信號采集能力強，兼顧高擴增效率；具防污染體系，有效避免氣溶膠污染。
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·反轉(zhuǎn)錄試劑盒：包含反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的全套試劑，可直接使用可調(diào)整使用。
·反轉(zhuǎn)錄預(yù)混試劑：反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)無需調(diào)整，操作簡便。
·去基因組反轉(zhuǎn)錄預(yù)混試劑：去gDNA，定量結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
·一管化去基因組反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液：一管化、含去gDNA，qPCR模板制備的最佳選擇。
一步法RT-PCR
一步法RT-PCR專用預(yù)混液，反轉(zhuǎn)錄和PCR在同一管內(nèi)進行，操作便攜。
一步法qRT-PCR
高特異，高靈敏，速度快，可選防污染體系，適用于RNA病毒檢測的qRT-PCR預(yù)混液。
